制備液相色譜儀,是一款功能強大、兼容性高、效率高的模塊化制備色譜系統。該儀器是在經(jīng)典色譜的基礎上,引用氣相色譜理論,從技術(shù)上將流動(dòng)相改為高壓輸送的。實(shí)驗室使用的測試儀器很多,其中液相色譜就是其中之一。
制備液相色譜儀的柱越長(cháng),分離度越高,但柱壓更高,分離所需時(shí)間更長(cháng);但分離度與理論塔板數的平方根成正比,所以一昧增加柱長(cháng)并不是很有效的分離手段,一般情況下,150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數。
流動(dòng)相通過(guò)高壓泵進(jìn)入系統,樣品溶液通過(guò)注射器進(jìn)入流動(dòng)相,流動(dòng)相加載到色譜柱(固定相)中。由于樣品溶液中各組分在兩相中的分配系數不同,經(jīng)過(guò)兩相反復吸附-解吸分配后,各組分的運動(dòng)速度有很大的不同。它被分離成一個(gè)單獨的組件,然后依次從列中流出。當樣品濃度通過(guò)檢測器時(shí),樣品濃度被轉換成電信號并傳送給記錄器,數據以地圖的形式打印出來(lái)。
而對于粒徑來(lái)說(shuō),它影響的則是色譜分離度,粒徑越小,分離越快,柱效越高,但柱壓力越高,柱容易被污染,導致柱壽命降低。常見(jiàn)分析柱通常使用5um填料,復雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑,更大內徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。
如果固定相選擇是正確,但是分離度不夠,那么選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,因此如何選擇填料粒徑需要根據現實(shí)情況而定。